|
|
Inhibice mnohočetné lékové rezistence mediované P-glykoproteinem a STAT3 signální dráhy polymerními konjugáty nesoucími deriváty proteasových inhibitorů
Starenko, Daniil ; Kovář, Marek (vedoucí práce) ; Truksa, Jaroslav (oponent)
Nádorové buňky exprimující zvýšené hladiny některých ABC transportérů (hlavně P- glykoproteinu) se stávají rezistentními vůči mnoha často i strukturně a funkčně odlišným léčivům. Tato tzv. mnohočetná léková rezistence může být významnou překážkou pro úspěšnou chemoterapii maligních onemocnění. V současné době je známo značné množství nízkomolekulárních látek schopných potentně inhibovat P-glykoprotein, ale žádná z nich se zatím neuplatňuje v klinické praxi. STAT3 je transkripčním faktorem důležitým pro mnohé fyziologické procesy, nicméně jeho trvalá aktivace může vést k maligní transformaci a v nádorových buňkách se podílet na snížení citlivosti k chemoterapii. STAT3 je tudíž jedním z potenciálních cílů pro nově vyvíjená protinádorová léčiva. Inhibice STAT3 signální dráhy vede ke snížení proliferace nádorových buněk a jejich zvýšené citlivosti k indukci apoptózy. Ve výzkumu nových přístupů k léčbě nádorových onemocnění je věnována velká pozornost zvýšení efektivity a snížení nežádoucích účinků konvenčních cytostatik použitím nanomateriálů a systémů pro dopravu léčiv do nádorové tkáně. Jedním z nich jsou nosiče založené na kopolymerech N-(2- hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA kopolymery). V rámci této diplomové práce bylo hlavním cílem vyhodnotit efektivitu derivátů několika vybraných inhibitorů HIV...
|
|
|
Protinádorová aktivita polymerních konjugátů nesoucích deriváty proteasových inhibitorů a konvenčních cytostatik pro léčbu nádorů hlavy a krku
Běhalová, Kateřina ; Kovář, Marek (vedoucí práce) ; Vodička, Pavel (oponent)
Nádory hlavy a krku představují celosvětově zhruba 4,6 % všech maligních onemocnění a jejich incidence neustále roste. Navzdory tomu vývoj chemoterapeutik v této oblasti spíše stagnuje. Jako jedna z nadějných možností se jeví využití léčiv originálně vyvinutých jako inhibitory HIV virové proteasy, u nichž byla popsána i protinádorová aktivita. Esterifikace OH skupiny těchto léčiv 5-methyl-4-oxohexanovou kyselinou umožňuje jejich připojení pH-senzitivní hydrazonovou vazbou na hydrofilní biokompatibilní HPMA kopolymerní nosič. Tato vazba zajistí zlepšení farmakokinetiky navázaného léčiva, prodlouží jeho dobu cirkulace v krevním oběhu, sníží nežádoucí účinky a zároveň umožní pasivní akumulaci léčiva v nádoru díky EPR efektu. Celkem bylo takto derivatizováno šest proteasových inhibitorů (ritonavir, lopinavir, saquinavir, indinavir, nelfinavir a atazanavir). Ritonavir a jeho derivát byly testovány v rámci předchozího projektu a byly zde využity jako referenční látky. Po úvodním stanovení in vitro cytostatické a cytotoxické aktivity v buněčných liniích FaDu (lidský karcinom hlavy a krku), SCC7 (myší skvamózní karcinom), 4T1 (myší prsní karcinom) a CT26 (myší karcinom kolon) byl na základě získaných dat zvolen derivát lopinaviru jako derivát s nejvyšší in vitro protinádorovou aktivitou. Aktivita tohoto derivátu...
|
|
|
Parazitární cystatiny jako inhibitory cysteinových proteas: strukturní aspekty funkční specifity a evoluce
Buša, Michal ; Mareš, Michael (vedoucí práce) ; Hudeček, Jiří (oponent) ; Kukačka, Zdeněk (oponent)
Proteiny z rodiny cystatinů jsou důležitými inhibitory cysteinových proteas typu katepsinů a účastní se řady patologií. Parazitární cystatiny jsou atraktivní cílové molekuly pro regulaci parazitů, ale je o nich dosud málo informací. Tato práce se zaměřuje na cystatiny dvou významných krevsajících parazitů: klíštěte obecného (Ixodes ricinus) jako hlavního vektoru lymské boreliózy a klíšťové encefalitidy, a motolice jaterní (Fasciola hepatica), původce fasciolózy. Byla provedena funkční a rentgenostrukturní charakterizace čtyř nových cystatinů, která umožnila určit strukturní příčiny inhibiční specifity a vysvětlit je v kontextu evoluce cystatinů a jejich fyziologické role. Cystatin FhCyLS-2 z F. hepatica má širokou inhibiční specifitu a hraje pravděpodobně duální roli při regulaci proteolytických systémů v tkáni hostitele a ve střevu parazita. FhCyLS-2 kombinuje unikátním způsobem charakteristiky dvou podrodin cystatinů a představuje modelového zástupce nové evoluční skupiny cystatinů identifikované u několika řádů parazitických motolic. Ricistatin a iristatin jsou cystatiny ze slin I. ricinus, jejichž imunomodulační působení na hostitele je způsobeno výjimečně úzkou inhibiční specifitou. Ta byla vysvětlena strukturními modifikacemi ve vazebných segmentech inhibitorů. Modifikace mají jiný charakter u...
|
|
|
Functional analysis of tick salivary serine and cysteine protease inhibitors
KOTÁL, Jan
The proposed thesis focuses on the characterization of two protease inhibitors present in tick saliva. More specifically, the thesis presents immunomodulatory properties, biochemical specificity and structure of a cysteine protease inhibitor named Iristatin. Another characterized protein, IRS-8, comes from a serpin family (serine protease inhibitors) and inhibits blood coagulation and complement system in the host. Furthermore, the thesis provides a literature overview and discussion of tick salivary molecules in the context of tick-host-pathogen interaction, vaccination potential and medicine potential. Two review manuscripts, which are part of this thesis summarize the effects of tick saliva and protease inhibitors on host immune mechanisms.
|
|
|
IrAM4: Partial characterisation of a molecule similar to \recke{alpha}\dindex{2}-macroglobulin from a tick \kur{Ixodes ricinus}
ABSOLONOVÁ, Markéta
Ixodes ricinus is a hard tick that can transmit several diseases that are capable of affecting humans. Among those are tick-borne encephalitis and Lyme disease. The focus of this work is on IrAM4, a member of tick ?2-macroglobulin family (?2M-F) of proteins which belong to the evolutionarily oldest constituents of the innate immune system. ?2-macroglobulins are protease inhibitors and act primarily in inactivation of proteases secreted by invading pathogens within their infection cycle. The aim of this study was to identify ?2-M of Ixodes ricinus (IrAM4) from corresponding ortholog of protein ?2-M named IsAM4 present in the genome of closely related Ixodes scapularis. The partial sequence was determined by amplification of cDNA and subsequent sequencing of PCR products. RT-PCR tissue profiling revealed that IrAM4 is present in ovaries and salivary glands but not in the tick gut. The recombinant fragment of IrAM4 was afterwards prepared for immunization of a rabbit and the obtained polyclonal antibodies were used for Western blot analysis. The results showed that IrAM4 is mainly present in the hemolymph and probably in salivary glands and ovaries but it is not expressed in the gut. The native IrAM4 seems to be composed of two disulfide bound subunits. However, the exact structure of the molecule was not analyzed in this work.
|
host ::
RSS.